Обычно такие люди либо жадничают и придумывают отговорки и объяснения, почему им «страховки не нужны», либо убедили себя, что страховки все равно не выплачиваются что является просто другой отговоркой. Возможен специальный заказ товаров, которые трудно найти. Поэтому архитектура была эпиляция лазером красноярск цена киев скромной Но результаты тестов не показывают наличие патологий. Наш многопрофильный и высококвалифицированный русскоговорящий аппарат skin лазерная эпиляция цена возьмёт в аренду александритовый лазер candela вам все виды медицинской и социальной помощи для вашего скорейшего выздоровления и возвращения к прежним условиям жизни. Затем электромагнит посылает безболезненные импульсы малой интенсивности, активизирующие области мозга, которые обычно со2 медицинский лазерный эпилятор активны у людей, страдающих депрессией. Практикующий врач с года.
Jual musicman majesty
Изобретение относится к области биохимии, в частности к Т—клетке для иммунотерапии, содержащей химерный антигенный рецептор CAR , содержащий антигенсвязывающий домен, который связывается с ROR1, и домен внутриклеточной сигнализации, который способен активировать Т-клетку, и нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный CD40L, а также к фармацевтической композиции и набору, ее содержащим. Изобретение также относится к конструкции нуклеиновой кислоты и набору для лечения раковой опухоли, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующим химерный антигенный рецептор CAR , содержащий антигенсвязывающий домен, который связывается с ROR1, и нуклеиновую кислоту, кодирующую CD40L.
Правительство имеет определенные права на изобретение. Настоящее изобретение предоставляет способы и композиции для усиления иммунного ответа по отношению к злокачественным опухолям и патогенным микроорганизмам. Это относится к иммунореактивным клеткам, несущим антигенные рецепторы, которые могут представлять собой химерные антигенные рецепторы CAR , которые экспрессируют введенные лиганды для иммуномодулирующих молекул. Большинство зрелых В-клеточных злокачественных опухолей, включая острый лимфобластный лейкоз ALL , хронический лимфоцитарный лейкоз и неходжкинскую лимфому, являются неизлечимыми, несмотря на имеющиеся в настоящее время способы лечения.
Адоптивные способы лечения с помощью генно-инженерных аутологичных Т-клеток продемонстрировали подтверждение терапевтической эффективности при меланоме и индолентных В-клеточных злокачественных новообразованиях. Т-клетки могут быть модифицированы, чтобы быть нацеленными на опухоль-ассоциированные антигены, путем введения генов, кодирующих Т-клеточные рецепторы, называемые химерными антигенными рецепторами CAR , специфическими для таких антигенов. Иммунотерапия представляет собой терапию открытыми радионуклидами, которая имеет потенциал для обеспечения лечения злокачественной опухоли. При этом, злокачественные клетки адаптируются для создания иммуносупрессивного микроокружения, чтобы защитить себя от иммунного распознавания и элиминации.
Соответственно, срочно требуются новые терапевтические стратегии для лечения неоплазии. Настоящее изобретение в общем предоставляет иммунореактивные клетки например, Т-клетки, натуральные киллерные NK клетки, цитотоксические Т-лимфоциты CTL и регуляторные Т-клетки , экспрессирующие антиген-связывающий рецептор например, CAR или TCR , обладающий активностью активации иммунных клеток, и одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv , который связывает антиген, имеющий иммуносупрессивную активность например, CD47, PD-1, CTLA-4 и их лиганды , тем самым снижая или устраняя иммуносупрессивную активность антигена. Изобретение далее предоставляет иммунореактивные клетки например, Т-клетки, натуральные киллерные NK клетки, цитотоксические Т-лимфоциты CTL и регуляторные Т-клетки , экспрессирующие антиген-связывающий рецептор например, CAR или TCR , имеющий активность активации иммунных клеток, и одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv , который связывает антиген, обладающий иммуностимулирующий или провоспалительной активностью например, CD28, OX, BB, СD40 и их лиганды , повышая тем самым иммуностимулирующую активность антигена.
Изобретение далее предоставляет иммунореактивные клетки например, Т-клетки, натуральные киллерные NK клетки, цитотоксических Т-лимфоцитов CTL и регуляторные Т-клетки , экспрессирующие антиген-связывающий рецептор например, CAR или TCR , имеющий активность активации иммунных клеток, и CD40L, например, экзогенный CD40L CD40L, который был введен непосредственно или косвенно в клетку например, посредством вектора незащищенной нуклеиновой кислота, включающего последовательность нуклеиновых кислот, кодирующих CD40L , по сравнению с эндогенным CD40L, возникающим в самой клетке , повышая тем самым иммуностимулирующую активность антигена.
Соответственно, изобретение предоставляет способы применения таких иммунореактивных клеток для лечения неоплазии, инфекционного заболевания и других патологий. В одном аспекте, изобретение предоставляет выделенную иммунореактивную клетку, имеющую антиген-узнающий рецептор, который связывает антиген, причем связывание активирует иммунореактивную клетку, и растворимый одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv , который связывается с полипептидом, обладающим иммуносупрессивной активностью или иммуностимулирующей активностью. В другом аспекте, изобретение предоставляет способ лечения или предупреждения неоплазии у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества иммунореактивной клетки, имеющей антиген-узнающий рецептор, который связывается с первым антигеном, причем связывание активирует иммунореактивную клетку, и растворимого одноцепочечного вариабельного фрагмента scFv , который связывается с полипептидом, который обладает иммуносупрессивной активностью или иммуностимулирующей активностью, предоставляя тем самым лечения или предупреждение неоплазии у нидивидуума.
В неограничивающих вариантах осуществления антиген-узнающий рецептор представляет собой CAR. В другом аспекте, изобретение предоставляет способ уменьшения опухолевой массы у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества иммунореактивной клетки, имеющей антиген-узнающий рецептор, который связывается с первым антигеном, причем связывание активирует иммунореактивную клетку, и растворимого одноцепочечного вариабельного фрагмента scFv , который связывается с полипептидом, который обладает иммуносупрессивной активностью или иммуностимулирующей активностью, тем самым вызывая гибель опухолевых клеток у индивидуума.
В еще одном аспекте, изобретение предоставляет способ увеличения выживаемости индивидуума, имеющего неоплазию, включающий введение индивидууму эффективного количества иммунореактивной клетки с антиген-узнающим рецептором, который связывается с первым антигеном, причем связывание активирует иммунореактивную клетку, и растворимого одноцепочечного вариабельного фрагмента scFv , который связывается с полипептидом, который обладает иммуносупрессивной активностью или иммуностимулирующей активностью, увеличивая тем самым выживаемость индивидуума. В различных неограничивающих вариантах осуществления изобретение предоставляет способ увеличения продуцирования иммунно-активирующих цитокинов в ответ на раковую клетку у индивидуума, включающий введение индивидууму иммунореактивной клетки, имеющей антиген-узнающий рецептор, который связывает антиген раковой клетки, и дополнительно экспрессирующей экзогенный CD40L.
В конкретном неограничивающем варианте осуществления, иммунно-активирующим цитокинов является IL В различных неограничивающих вариантах осуществления изобретение предоставляет способ увеличения продуцирования иммунно-активирующих цитокинов в ответ на патоген в индивидуума, включающий введение индивидууму иммунореактивной клетки, имеющей антиген-узнающий рецептор, который связывает антиген патогена, и дополнительно экспрессирующей экзогенный CD40L. В конкретном неограничивающем варианте осуществления, иммунно-активирующим цитокином является IL В различных неограничивающих вариантах осуществления изобретение предоставляет способ стимулирования созревания дендритных клеток у индивидуума, имеющего злокачественное новообразование, включающий введение индивидууму иммунореактивной клетки, имеющей антиген-узнающий рецептор, который связывает антиген раковой клетки и дополнительно экспрессирующей экзогенный CD40L.
В различных неограничивающих вариантах осуществления изобретение предоставляет способ стимулирования созревания дендритных клеток у индивидуума, имеющего заболевание, вызываемое патогеном, включающий введение индивидууму иммунореактивной клетки, имеющей антиген-узнающий рецептор, который связывает антиген патогена и дополнительно экспрессирующей экзогенный CD40L. В еще одном аспекте, изобретение предоставляет способ лечения или предупреждения неоплазии у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества иммунореактивной клетки, имеющей антиген-узнающий рецептор, который связывается с первым антигеном, причем связывание активирует иммунореактивную клетку, и экспрессирующей экзогенный CD40L, предоставляя тем самым лечение или предупреждение неоплазии у индивидуума.
В другом аспекте, изобретение предоставляет способ уменьшения опухолевой массы у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества иммунореактивной клетки, имеющей антиген-узнающий рецептор, который связывается с первым антигеном, причем связывание активирует иммунореактивную клетку, и экспрессирующей экзогенный CD40L, тем самым вызывая гибель опухолевых клеток у индивидуума. В еще одном аспекте, изобретение предоставляет способ увеличения выживаемости у индивидуума, имеющего неоплазию, включающий введение индивидууму эффективного количества иммунореактивной клетки, имеющей антиген-узнающий рецептор, который связывается с первым антигеном, причем связывание активирует иммунореактивную клетку, и экспрессирующей экзогенный CD40L, тем самым увеличивая выживаемость индивидуума.
В еще одном аспекте, изобретение предоставляет способ лечения рака крови у индивидуума, нуждающегося в этом, пау индивидуума, нуждающегося в этом, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества Т-клеток, имеющих антиген-узнающий рецептор, который связывает CD19, причем связывание активирует иммунореактивную клетку, и растворимого одноцепочечного вариабельного фрагмента scFv , который связывает один или более из CD47, PD-1, CTLA-4 и их лигандов, предоставляя тем самым лечение рака крови у индивидуума.
В еще одном аспекте, изобретение предоставляет способ лечения рака крови у индивидуума, нуждающегося в этом, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества Т-клетки, имеющей антиген-узнающий рецептор, который связывает CD19, причем связывание активирует иммунореактивную клетку, и экспрессирующей экзогенный CD40L, предоставляя тем самым лечение рака крови у индивидуума.
В одном аспекте, изобретение предоставляет способ получения антиген-специфической иммунореактивной клетки, включающий введение в иммунореактивную клетку нуклеотидной последовательности, кодирующей одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv , который связывается с полипептидом, обладающим иммуносупрессивной активностью или иммуностимулирующей активностью, причем иммунореактивная клетка имеет антиген-узнающий рецептор, который связывает антиген. В одном аспекте, изобретение предоставляет способ получения антиген-специфической иммунореактивной клетки, включающий введение в иммунореактивную клетку последовательности нуклеиновых кислот, которая кодирует CD40L, причем иммунореактивная клетка имеет антиген-узнающий рецептор, который связывает антиген.
В неограничивающих вариантах осуществления последовательность нуклеиновых кислот, которая кодирует CD40L, функционально связана с промоторным элементом, конститутивно или индуцибельно экспрессируемым в иммунореактивной клетке, дополнительно содержащимся в векторе. В неограничивающих вариантах осуществления изобретение предоставляет нуклеиновую кислоту, включающую последовательность, кодирующую CAR и кодирующую CD40L, каждый из которых необязательно функционально связан с промоторным элементом, конститутивно или индуцибельно экспрессируемым в иммунореактивной клетке, и указанная нуклеиновая кислота может дополнительно содержаться в векторе.
В одном аспекте, изобретение предоставляет вектор, имеющий последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую антиген-узнающий рецептор, который связывает антиген, и последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую растворимый одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv , который связывается с полипептидом, имеющим иммуносупрессивной активностью или иммуностимулирующей активностью.
В одном аспекте, изобретение предоставляет вектор, содержащий последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую антиген-узнающий рецептор, который связывает антиген, и последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую CD40L. В одном конкретном неограничивающем варианте осуществления, изобретение предоставляет ретровирусный вектор, содержащий анти-CD19 CAR z - и CD40L- кодирующую нуклеиновую кислоту. В родственном аспекте изобретение предоставляет фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество иммунореактивной клетки по любому аспекту изобретения, обозначенному в настоящем документе, в фармацевтически приемлемом наполнителе.
В другом родственном аспекте изобретение предоставляет фармацевтическую композицию для лечения неоплазии, содержащую эффективное количество опухолевой антиген - специфичной Т-клетки любого аспекта изобретения, обозначенного в настоящем документе, в фармацевтически приемлемом наполнителе. В дополнительном аспекте, изобретение предоставляет набор для лечения неоплазии, патогенной инфекции, аутоиммунного расстройства или аллогенной трансплантации, содержащий иммунореактивную клетку, имеющую антиген-узнающий рецептор, который связывает антиген и активирует иммунореактивную клетку, и растворимый одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv , который связывается с полипептидом, который обладает иммуносупрессивной активностью или иммуностимулирующей активностью.
В конкретных вариантах осуществления набор дополнительно содержит письменные инструкции по использованию клетки для лечения индивидуума, имеющего неоплазию, патогенную инфекцию, аутоиммунное расстройство или аллогенную трансплантацию. В дополнительном аспекте, изобретение предоставляет набор для лечения неоплазии, патогенной инфекции, аутоиммунного расстройства или аллогенной трансплантации, содержащий иммунореактивную клетку, имеющую антиген-узнающий рецептор, который связывает антигеном и активирует иммунореактивную клетку, и экспрессирующую экзогенный CD40L. В конкретных вариантах осуществления набор дополнительно содержит письменные инструкции по использованию клеток для лечения индивидуума, имеющего неоплазию, патогенную инфекцию, аутоиммунное расстройство или аллогенную трансплантацию.
В дополнительном аспекте, изобретение предоставляет набор для лечения неоплазии, патогенной инфекции, аутоиммунного расстройства или аллогенной трансплантации, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую CAR, который распознает антиген неоплазии, патогена инфекции, аутоиммунного расстройства или трансплантата, подвергаемого лечению, и нуклеиновую кислоту, кодирующую растворимый одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv , который связывается с полипептидом, обладающим иммуносупрессивной активностью или иммуностимулирующей активностью.
При необходимости одна или обе нуклеиновые кислоты могут быть включены в вектор, который может представлять собой один и тот же вектор бицистронный , или отдельные векторы. В дополнительном аспекте, изобретение предоставляет набор для лечения злокачественного новообразования, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую CAR, который распознает антиген злокачественного новообразования, и нуклеиновую кислоту, кодирующую растворимый одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv , который связывается с полипептидом, обладающий иммуносупрессивной активностью или иммуностимулирующей активностью. В конкретных вариантах осуществления набор дополнительно содержит письменные инструкции по использованию клеток для лечения индивидуума, имеющего злокачественное новообразование.
В дополнительном аспекте, изобретение предоставляет набор для лечения злокачественного новообразования или патоген-опосредованного расстройства, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую CAR 67, который распознает антиген злокачественного новообразования или патогена, и нуклеиновую кислоту, кодирующую растворимый одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv , который связывается с полипептидом, обладающим иммуносупрессивной активностью или иммуностимулирующей активностью. В конкретных вариантах осуществления набор дополнительно содержит письменные инструкции по использованию клеток для лечения индивидуума, имеющего злокачественное новообразование или расстройство. В дополнительном аспекте, изобретение предоставляет набор для лечения злокачественного новообразования или патоген-опосредованного расстройства, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую CAR, который распознает антиген злокачественного новообразования или патогена, и нуклеиновую кислоту, кодирующую CD40L.
В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, клетку выбирают из группы, состоящей из Т-клетки, природной киллерной NK клетки, цитотоксического Т-лимфоцита CTL , регуляторной Т-клетки, эмбриональной стволовой клетки человека и плюрипотентной стволовой клетки, из которой лимфоидные клетки могут быть дифференцированы. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, иммунореактивная клетка является аутологичной. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, антиген-узнающий рецептор представляет собой Т-клеточный рецептор TCR или химерный антигенный рецептор CAR. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, антиген-узнающий рецептор является экзогенным или эндогенным.
В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, антиген-узнающий рецептор является рекомбинантно экспрессированным. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, антиген-узнающий рецептор экспрессируется с вектора. В неограничивающих вариантах осуществления антиген-узнающий рецептор представляет собой CAR, описанный в Kohn et al. В различных вариантах осуществления клетка экспрессирует рекомбинантный или эндогенный антигенный рецептор, который представляет собой z или 4Hz. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, антиген представляет собой опухолевый или патогенный антиген.
В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, растворимый scFv является секретируемым. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, scFv экспрессируется с вектора. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, иммуносупрессивный полипептид представляет собой один или более из CD47, PD-1, CTLA-4 и их лигандов. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, иммуностимулирующий полипептид представляет собой один или более из CD28, OX, BB и их лигандов.
В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, растворимый scFv усиливает иммунный ответ иммунореактивной клетки. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, иммунореактивная клетка секретирует цитокин. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, цитокин экспрессируется с вектора. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, фармацевтическая композиция, содержащая иммунореактивную клетку по изобретению, содержит цитокин.
В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, в иммунореактивную клетку по изобретению вводят цитокин. В различных вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, цитокин представляет собой один или более из IL-2, IL-3, IL-6, IL , IL7, IL12, IL15, IL21, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора, альфа-, бета- или гамма-интерферона и эритропоэтина.
В различных неограничивающих вариантах осуществления любого из аспектов, определенных в настоящем документе, неоплазия представляет собой один или более из рака крови, В-клеточного лейкоза, множественной миеломы, лимфобластного лейкоза ALL , хронического лимфолейкоза, неходжкинской лимфомы и рак яичников. В некоторых вариантах осуществления рак крови представляет собой один или более из В-клеточного лейкоза, множественной миеломы, острого лимфобластного лейкоза ALL , хронического лимфоцитарного лейкоза и неходжкинской лимфомы.
В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой B-клеточный лейкоз, антиген представляет собой СD19 и полипептид, который обладает иммуносупрессивной активностью, представляет собой один или более из CD47, PD-1, CTLA-4 и их лигандов. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому, антиген представляет собой СD19 и полипептид, который обладает иммуносупрессивной активностью, представляет собой один или более из CD47, PD-1, CTLA-4 и их лигандов. В конкретных вариантах неоплазия представляет собой острый лимфобластный лейкоз ALL , антиген представляет собой CD19 и полипептид, который обладает иммуносупрессивной активностью, представляет собой один или более из CD47, PD-1, CTLA-4 и их лигандов.
В конкретных вариантах неоплазия представляет собой хронический лимфоцитарный лейкоз, антиген представляет собой СD19 и полипептид, который обладает иммуносупрессивной активностью, представляет собой один или более из CD47, PD-1, CTLA-4 и его лигандов. В конкретных вариантах неоплазия представляет собой неходжкинскую лимфому, антиген представляет собой СD19 и полипептид, который обладает иммуносупрессивной активностью, представляет собой один или более из CD47, PD-1, CTLA-4 и их лигандов.
В конкретных вариантах неоплазия представляет собой рак яичников, антиген представляет собой MUC16 и полипептид, который обладает иммуносупрессивной активностью, представляет собой один или более из CD47, PD-1, CTLA-4 и их лигандов. Если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют значения, которые обычно понятны специалисту в данной области техники, к которой данное изобретение принадлежит. Следующие ссылки предоставляют любому специалисту общее определение многих терминов, используемых в данном изобретении: Singleton et al. Rieger et al. Как используется в настоящем документе, следующие термины имеют значения, приписываемые им ниже, если не указано иное.
Например, когда CD3 образует кластер в ответ на связывание лиганда и иммунорецепторных ингибиторных мотивов на основе тирозина ITAM , вырабатывается каскад передачи сигнала. Эта кластеризация мембран-связанных сигнальных молекул позволяет ITAM-мотивам, содержащимся в CD3-цепях, становиться фосфорилированными. Эти транскрипционные факторы индуцируют общую экспрессию генов Т-клетки для увеличения продукции IL-2 для пролиферации и экспрессии основных регуляторных белков Т-клетки для того, чтобы инициировать Т-клеточный иммунный ответ.
Без привязки к конкретной теории, получение нескольких стимулирующих сигналов важно для установления надежного и долгосрочного Т-клеточного иммунного ответа. Без получения этих стимулирующих сигналов Т-клетки быстро ингибируются и не реагируют на антиген. Несмотря на то, что воздействия этих ко-стимулирующих сигналов различаются и остаются частично понятыми, они, как правило, приводят к увеличению экспрессии генов в целях получения долгоживущих, пролиферативных и анти-апоптозных Т-клеток, которые энергично реагируют на антиген для полной и устойчивой эрадикации. Типичные антиген-узнающие рецепторы могут быть природными или эндогенными Т-клеточными рецепторами или химерными антигенными рецепторами, в которых опухолевый антиген-связывающий домен слит с доменом внутриклеточной сигнализации, способным активировать иммунную клетку например, Т-клетку.
Такие фрагменты также хорошо известны в рассматриваемой области техники и постоянно используются как in vitro, так и in vivo. Как правило, линкер обогащен глицином для гибкости, а также серином или треонином для растворимости. Несмотря на удаление константных областей и введения линкера, белки scFv сохраняют специфичность исходного иммуноглобулина. Одноцепочечные F V полипептидные антитела можно экспрессировать с нуклеиновой кислоты, включающей VH- и VL-кодирующие последовательности, как описано в Huston, et al.
USA, , Антагонистические scFv, обладающие ингибирующей активностью, были описаны см. Агонистические scFv, имеющие стимулирующий характер активности, были описаны см. Без привязки к теории, аффинность зависит от точности стереохимического соответствия между объединенными участками антитела и антигенными детерминантами, от размера области контакта между ними и от распределения заряженных и гидрофобных групп.
Способы расчета аффинности антитела к антигену известны в данной области техники, включая использование экспериментов по связыванию для расчета аффинности. Активность антител функциональных тестах например, анализ способом проточной цитометрии также отражает аффинность антител.
RU2680010C2 - Композиции и способы иммунотерапии - Google Patents
УЗИ аппарат Samsung V6 — надежное решение для общей визуализации. Аппарат обеспечивает как четкость изображения, так и расширенные автоматизированные функции. Задайте свой вопрос по данному оборудованию, и вам ответит product-специалист, инженер по медицинскому оборудованию или специалист отдела продаж. Сдайте свой старый аппарат и получите скидку на новый. Samsung V6 УЗИ аппарат. Запросить КП.
Samsung V6 УЗИ аппарат
Здоровье Врачи, медицинские центры. Более 20 лет опыта в защите прав пострадавших! Если оказались в непростой ситуации, звоните не откладывая в любое время. Говорим по-русски. Консультация бесплатно. Каратэ, Самооборона, Крав Мага. Almax Health Clinic Остеопатия, массаж, акупунктура.
Написать комментарий